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Long term low dose trimethoprim, a Toxoplasma gondii-spiked ointment was found to be effective at preventing C. trachomatis colonization [11]. However, in another study, trimethoprim failed to prevent either invasive or latent stages [22]. We therefore investigated whether trimethoprim alone or in combination with a ointment might offer any benefit. Materials and Methods Ethics statement All mice were obtained from the Laboratory Animal Centre of University Oxford, and kept under a colony-reared conditions, where they were observed throughout all experimental procedures. Written and oral consent were also obtained from the owner of those mice. For this study, all procedures were conducted in accordance with the guidelines set by British Society for Experimental Biology. To ensure Nifedipine 180 Pills 20mg $369 - $2.05 Per pill safety and compliance, all animals were housed for at least 18 h (24 for ginkgo) under a 12/12 h light and dark cycle at 22° C. On the experiment day, we examined and assessed the mice's overall health by taking their body temperature rectal thermometers at regular intervals to determine if the mice were under an infectious disease condition or were not ill. After the experiment, at 9-10 AM mice were killed, which was achieved quickly, by means of an overdose the lethal injection and immediately killed by a lethal injection at 2 h following death. Mice were anaesthetized with ether, transcardially perfused 2% NaCl/0.9% Triton X-100 and then decapitated with a steel screw (Dr C. A. Jones, MRC Laboratory, University of Oxford, Oxford). Mucus secretion in the brain was collected at 4-10 h after decapitation and emulsion gel nifedipine buy analysed by flow cytometry to assess M. tuberculosis and C. trachomatis. Mice received a single administration of either dose trimethoprim or a combination ointment containing 1 mg/g trimethoprim, and then remained in a single cage for at least 48 h assessment of C. trachomatis and at least 3 days for measurement of T. gondii-induced clinical symptoms [23]. As all experimental procedures were conducted from 2 November to 22 December 2011 within our facility, we considered that all the animals used for this study were under their strict medical protocol. Statistical Analyses Results were analysed by one-way ANOVA with factors indicating the type of trimethoprim-antibacterial ointment used, treatment group, day, time, antibiotic groups (n = 5 per group), and the presence of Toxoplasma gondii infection (n = 4 per group). For the analysis of C. trachomatis, a 2 × factorial ANOVA with factors indicating the infection rate (n = 1/group and 10/n 3 per group) trimethoprim treatment (n = 1/group and 6/n 4/group) was conducted. P-values were obtained as the differences between means of each treatment group or between the antibiotic groups (n = 2 per group antibiotic). Statistical analyses of clinical parameters (serum creatinine, weight, body temperature) were used as the two-tailed paired t test. In the cases of non-significant results, P value from the t-test or a non-significant P value from the analysis of two independent groups were considered to be significantly different. Data are shown as means ± s.e.m. Acknowledgments We thank Sarah O'Mahony-Smith for her assistance in animal care and Chris Smith-Baker, Sohiel K. Ghanim and Rachael R. Boulton for their help in clinical observations. Funding: This work was partially funded by British Research Council (grant number 094514/Z/09/Z-068). The funders had no role in design, data collection and analysis, decision to publish, or preparation of the manuscript. Competing interests: authors declare that they have no competing interests. Data and materials availability: All relevant data are within the paper and its Supporting information file. Additional data related to this article may be requested from the authors.



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